Plataforma sin suero y definida químicamente para el crecimiento y la propagación de células HEK293 y la amplificación de vector viral de adenovirus

RESULTADOS Y DISCUSIONES

Crecimiento y adaptación a los medios definidos químicamente Las células 293-H se adaptaron directamente a tres formulaciones de medios de CD, cada uno de un proveedor diferente. Se monitoreó el crecimiento de 12 pasajes. Se calcularon los tiempos de duplicación, que se muestran en la Figura 1.

Figura 1.

Crecimiento y adaptación de células 293-H en medios definidos químicamente

• El tiempo de duplicación promedio fue similar entre el medio de control y el medio B.
• El medio A fue más lento que el medio de control.
• Los tiempos de duplicación promedio fueron de 27 a 34 horas, lentos pero aceptables.

Optimización de la amplificación de adenovirus

Los parámetros de procesos, incluida la MOI (multiplicidad de infección) y la DOI (duración de infección) se optimizaron en matraces de agitación de 125 mL. La productividad total del vector se normalizó al medio de control MOI 50 de 72 horas. Estos datos se muestran en la Figura 2.

Figura 2.

Optimización de MOI y DOI a fin de maximizar la productividad de adenovirus

• Se logró la productividad más alta para las 3 formulaciones de medios con una MOI de 50 y una DOI de 72 horas.
• El medio A arrojó como resultado un incremento del ~40 % en la productividad sobre el medio de control, mientras que el medio B produjo solo un 60 % del medio de control.

Rendimiento de medio definido químicamente en el biorreactor iCELLis Nano

Luego se usaron los medios A y B para adaptar la escala de la producción al biorreactor iCELLis Nano. Se determinaron los valores de referencia de estos medios en comparación con DMEM, y contienen un 10 % de FBS.

Figura 3.

Comparación del crecimiento celular en el biorreactor iCELLis Nano y el matraz de control

• El índice de crecimiento del biorreactor iCELLis Nano es más lento que el matraz de control para el medio B y el DMEM con medio de control con 10 % de FBS.
• Los datos metabólicos mostraron un consumo de glucosa más elevado en los matraces de control en comparación con el biorreactor iCELLis Nano (no se muestran los datos).
• No se encontraron cantidades significativas de células en los medios recirculantes, lo que indica que un > 95 % de la biomasa estaba contenida en el lecho comprimido (no se muestran los datos).

Se infectó el biorreactor con Ad5, según se describe en la sección de métodos. Las productividades totales se normalizaron según la productividad del medio de control con suero en el biorreactor iCELLis Nano. Los resultados se muestran en la Figura 4.

Figura 4.

Productividad de Ad5 en el biorreactor iCELLis Nano con medios definidos químicamente

• La productividad general en el medio A fue significativamente más alta que la productividad en el medio B y DMEM, con medios de control de 10 % de DMEM.
• Productividad generalmente uniforme con el biorreactor iCELLis Nano y los matraces de control para las 2 formulaciones de medios definidos químicamente. La productividad fue inferior en el biorreactor iCELLis Nano con medios de control en comparación con el matraz de control.
• El biorreactor iCELLis Nano puede utilizarse para producir adenovirus con medios libres de suero y definidos químicamente, con productividades virales similares o mayores que los medios que contienen suero.